Distribution and genetic diversity of the human polyomaviruses JC and BK in surface water and sewage treatment plant during 2009 in Porto Alegre, Southern Brazil / Distribuição e diversidade genética dos poliomavírus humanos JC e BK em águas superficiais e de estação de tratamento de esgoto durante 2009 em Porto Alegre, sul do Brasil

Abstract The human polyomaviruses JC and BK (JCPyV and BKPyV) are ubiquitous, species-specific viruses that belong to the family Polyomaviridae. These viruses are known to be excreted in human urine, and they are potential indicators of human wastewater contamination. In order to assess the distribution of both JCPyV and BKPyV in urban water samples collected from a sewage treatment plant (STP) and from a canalized water stream of Porto Alegre, Brazil, two nested-PCR assays were optimized and applied to the samples collected. The amplicons obtained were submitted to sequencing, and the sequences were analyzed with sequences of human polyomaviruses previously deposited in GenBank. Twelve out of 30 water samples (40%) were JCPyV positive, whereas six samples (20%) were BKPyV positive. The sequencing results confirmed the presence of JCPyV subtypes 1 and 3, whereas only BKPyV Ia and Ib were found. This study shows for the first time the presence of human polyomaviruses in surface water and in samples collected in a sewage treatment plant in southern Brazil.

Resumo Os poliomavírus humanos JC e BK (JCPyV e BKPyV) são virus ubíquos, espécie-específicos, pertencentes à família Polyomaviridae. Estes vírus são conhecidos por serem excretados pela urina humana, sendo considerados potenciais indicadores de contaminação por águas residuais urbanas. Buscando acessar a distribuição de JCPyV e BKPyV em amostras de águas coletadas de uma estação de tratamento de esgoto e de um arroio canalizado de Porto Alegre, Brasil, duas técnicas de nested-PCR foram otimizadas e aplicadas às amostras coletadas. Os amplificados obtidos foram submetidos ao sequenciamento e suas sequências analisadas com base em sequências de poliomavírus humanos previamente depositadas no GenBank. Doze de 30 amostras de água (40%) foram positivas para JCPyV, enquanto 6 amostras (20%) foram positivas para BKPyV. Os resultados do sequenciamento confirmaram a presença dos subtipos 1 e 3 de JCPyV, enquanto apenas os BKPyV Ia e Ib foram encontrados. Este estudo demonstra pela primeira vez a presença de poliomavírus humanos em águas superficiais e em amostras coletadas em uma estação de tratamento de esgoto na região sul do Brasil.

Herpesvírus bovinos (BoHV-1.1 e BoHV-1.2b) em forma infecciosa em encéfalos de bovinos submetidos ao diagnóstico de raiva no estado do Rio Grande do Sul / Bovine herpesviruses (BoHV-1 and BoHV-1.2b) in infectious form in brains of cattle submitted to rabies diagnosis in the State of Rio Grande do Sul, Brazil

Verificou-se a incidência de herpesvírus bovinos (BoHVs) em encéfalos de bovinos submetidos ao diagnóstico de raiva no estado do Rio Grande do Sul. Para tanto, amostras coletadas durante dois anos (n=70) foram submetidas ao isolamento viral em cultivos celulares. Os BoHVs foram isolados em dois (2,9 por cento) encéfalos. Após serem submetidas à caracterização antigênica e molecular, as amostras foram subtipadas como BoHV-1.1 e BoHV-1.2b. A BoHV-1.1 foi isolada de um encéfalo que foi também positivo para raiva. O vírus da raiva foi identificado em 11 amostras (15,7 por cento). Estes achados revelam que a incidência de BoHVs em forma infecciosa em bovinos com encefalite foi baixa, embora represente 16,7 por cento (2/12) dos encéfalos nos quais um agente viral foi identificado. Tal fato confirma a já reportada associação entre BoHV-1 e encefalites. Esse é o primeiro relato da ocorrência de BoHV-1.2b, um subtipo considerado menos patogênico, em um caso de doença neurológica em bovinos.

The incidence of bovine herpesviruses (BoHVs) was determined in brains of cattle submitted to rabies diagnosis in the State of Rio Grande do Sul, Brazil. Brain samples collected in a two-year interval (n=70) were submitted to virus isolation in cell culture. The BoHVs were isolated from two (2.9 percent) of the brains. After the antigenic and molecular characterization, the isolated strains were subtyped as BoHV-1.1 and BoHV-1.2b. The BoHV-1.1 isolate was recovered from a brain sample that was also positive for rabies. Rabies virus was identified in 11 (15.7 percent) samples. These findings reveal that the incidence of infectious BoHVs in brains of cattle with encephalitis was low, although these represented 16.7 percent (2/12) of samples from which at least one viral agent was identified. This confirms the previously reported link between BoHV-1 and bovine encephalitis. However, it is the first report on the association of BoHV-1.2b, a putatively less pathogenic BoHV subtype, with neurological disease in cattle.

Caracterização de amostras do vírus da raiva, isoladas nas regiões Norte e Centro-Oeste do Brasil, com anticorpos monoclonais antilissavírus / Antigenic characterization of Brazilian rabies virus isolate North and Central West regions of Brazil with anti-lyssavirus monoclonal antibodies

The occurrence of rabies virus antigenic variants in North and Central West regions of Brazil was studied using 61 rabies viruses isolated from different species: 30 from domestic dogs, 20 from cattle, four from horses, two from cats, one from a human and four from unidentified species. The isolates were submitted to antigenic analyses by indirect immunofluorescence with a panel of 12 monoclonal antibodies (Mabs) to lyssavirus antigens. Antigenic analyses revealed consistent differences between isolates whose natural hosts were dogs and those of haematophagous bats, often isolated from cattle. Three out of four isolates from horses and one from a domestic dog showed patterns of reactivity found only in viruses of insectivorous bats, indicating that non-haematophagous bats do play a unique role in the transmission of the virus to other species.

Detecção do vírus da cinomose canina por RT-PCR utilizando-se oligonucleotídeos para os genes da fosfoproteína, hemaglutinina e neuraminidase / Detection of canine distemper virus by RT-PCR using oligonucleotides targeted to the phosphoprotein, hemagglutinin and neuraminidase genes

Empregou-se a técnica de reação em cadeia pela polimerase precedida de transcrição reversa para detecção do vírus da cinomose canina (CC). Para a padronização da técnica foram selecionados quatro pares de oligonucleotídeos (P1, P2, N1, H1), baseados em seqüências dos genes da fosfoproteína, neuraminidase e hemaglutinina, sendo utilizadas três cepas vacinais de vírus da CC como controles positivos. Foram analisadas três amostras isoladas de cães com cinomose e quatro amostras provenientes de cães com suspeita clínica de cinomose. Não houve amplificação nas amostras com suspeita clínica da doença. Os resultados obtidos com os oligonucleotídeos P1 e N1 foram superiores aos de H1. Os oligonucleotídeos P2 foram considerados inapropriados para a detecção do vírus da CC. Os amplicons obtidos com os oligonucleotídeos P1, N1 e H1 foram clivados com endonucleases de restrição, sendo os perfis das amostras virais comparados aos da amostra vacinal Lederle, utilizada como referência. Um padrão similar de restrição foi observado em todas as amostras analisadas

The reverse transcription-polymerase chain reaction was used to detect canine distemper virus (CDV). Four oligonucleotide pairs were selected (P1, P2, N1, H1), based on the sequences of the phosphoprotein, hemagglutinin and nuraminidase genes for assay standardization, and three CDV vaccine strains were used as positive controls. Three viral isolates from dogs with canine distemper and four samples from animals clinically suspected of distemper were analysed. No amplification was detected in suspected samples. Results obtained by using P1 and N1 oligonucleotides were superior to those with H1 ones. P2 oligonucleotides were considered inadequate for CDV detection. Amplicons resulting from amplification of P1, N1 and H1 oligonucleotides were submitted to cleavage by restriction endonucleases and restriction patterns of viral samples were compared to that of Lederle strain used as reference. A similar restriction pattern was observed in all analysed samples

Bovine respiratory syncytial virus: immunohistochemichal detection in mouse and bovine tissues using a Mab against human respiratory syncytial virus

An immunoistochemical (IHC) test was developed to detect bovine respiratory syncytial virus (BRSV) in cell cultures and tissues of experimentally infected mice and calves, using a commercial monoclonal antibody (Mab) against human respiratory syncytial virus (HRSV), as a less expensive alternative, instead of producing specific monoclonal antibodies to BRSV. Clinical samples from calves suffering respiratory disease were also submitted to this test. IHC detected BRSV antigens in mouse tracheas (3, 5 and 7 days post-infection) and lungs (5 and 7 days post-infection), and in one of three lungs from experimentally infected calves. Lungs samples from two naturally infected calves were tested and resulted positive for BRSV by the IHC test. These results suggest that this test may be used in the future for diagnosis as well as a useful tool to assess the distribution of BRSV infections in Brazilian herds.

Desenvolveu-se um teste de imunohistoquímica (IHQ) para detecção do vírus respiratório sincicial bovino (BRSV) multiplicado em cultivo celular e em tecidos de camundongos e bezerros infectados experimentalmente, utilizando um anticorpo monoclonal comercial contra o vírus respiratório sincicial humano (HRSV), como uma alternativa para eliminar os custos de produção de anticorpos monoclonais específicos para o BRSV. Amostras clínicas de bezerros com sintomatologia respiratória foram analisadas. A técnica mostrou-se eficiente na detecção de antígenos do BRSV em traquéias (3, 5 e 7 dias pós-infecção) e pulmões (5 e 7 dias pós-infecção) dos camundongos infectados e em uma das três amostras de pulmões dos bezerros infectados experimentalmente. Amostras de pulmões de dois animais com infecção natural foram positivas para BRSV. Conclui-se que o teste de IHQ pode ser usado no diagnóstico das infecções por BRSV e na avaliação da distribuição dessas infecções nos rebanhos bovinos brasileiros.

Co-infections with bovine herpesvirus type 5 and bovine viral diarrhoea virus

During a series of experiments attempting to reproduce clinically apparent bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5) infections, a group of calves was inadvertently infected with bovine viral diarrhoea virus (BVDV). Another group of calves was infected with BoHV-5 only. This paper reports the outcome of such infections. Two out of six calves solely infected with BoHV-5 displayed moderate to severe clinical signs. Three out of four calves of the group co-infected with BoHV-5 and BVDV developed severe clinical signs, two of them died. BoHV-5 virus was isolated to higher titres and for a longer period from the group of calves infected with both viruses. These results suggest that BVDV may enhance clinical signs induced by BoHV-5 and may also play a role in extending the period of BoHV-5 shedding.

Durante a realização de experimentos envolvendo inoculações experimentais com herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5), um grupo de bovinos foi acidentalmente também inoculado com vírus da diarréia viral bovina (BVDV). Os dados obtidos nesta co-infecção foram então comparados a aqueles observados em animais inoculados exclusivamente com BoHV-5. No grupo infectado com BoHV-5 somente, dois dos seis animais inoculados mostraram sinais clínicos de moderados a graves. No grupo co-infectado com BoHV-5 e BVDV, três dos quatro animais desenvolveram doença grave, e dois deles morreram. BoHV-5 foi isolado em títulos maiores e por um período de tempo mais longo no grupo co-infectado. Os resultados sugerem que o BVDV pode exacerbar os sinais clínicos induzidos pelo BoHV-5 e, ainda, aumentou os níveis de excreção deste último.

Otimização da imunoistoquímica para detecção de herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5) em tecidos do sistema nervoso central fixados com formaldeído / Optimization of immunohistochemistry for Bovine Herpesvirus 5 (BHV-5) detection on formalin-fixed tissues of the central nervous system

Com o objetivo de otimizar a técnica de imunoistoquímica para detecção de herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5) em tecidos do sistema nervoso central fixado em formaldeído, foram avaliados diferentes métodos de digestão enzimática, diferentes anticorpos e reagentes para bloqueio de reações inespecíficas. As reações apresentaram a máxima intensidade de coloração específica e a quantidade mínima de coloração de fundo quando foram usadas protease de Streptomyces griseus (0,1%) ou proteinase K de Tritirachium album limber (0,05%), mediante incubação durante 15 minutos a 37ºC. Entre os anticorpos monoclonais analisados, dois foram capazes de detectar BHV-5. As reações inespecíficas foram bloqueadas mais efetivamente pela incubação do tecido com caseína (0,5%), durante cinco minutos, ou leite em pó (2,5%), durante 60 minutos, ou soro eqüino (2,5%), durante 60 minutos. Com a técnica otimizada foi possível a detecção de BHV-5 em material de arquivo.

Caracterizaçäo de herpesvírus bovinos tipos 1 (BHV-1) e 5 (BHV-5) com anticorpos monoclonais / Monoclonal antibody characterization of bovine herpesviruses types 1 (BHV-1) and 5 (BHV-5)

O perfil antigênico de 45 herpesvírus (44 de bovinos, sendo seis amostras de referência de BHV-1 e 15 prováveis BHV-1; três amostras de referência de BHV-5 e 20 prováveis BHV-5) e uma amostra de herpesvírus bubalino (BuHV) foi examinado com um painel de anticorpos monoclonais (Acms) produzidos contra antígenos de herpesvírus bovinos. Para os exames, foi utilizada a prova de imunoperoxidase (IPX) sobre cultivos de células infectadas, tendo os Acms como anticorpos primários. A determinaçäo dos padröes de reatividade das amostras de vírus frente aos Acms permitiu a diferenciaçäo entre os tipos 1 e 5. Todas as amostras isoladas de casos de encefalite apresentaram perfil de BHV-5. Quatro amostras de BHV-5 isoladas de áreas geograficamente distintas apresentaram perfís de reatividade diferenciados em relaçäo às demais amostras do tipo 5. Duas amostras de vírus com perfil antigênico de BHV-5 foram isoladas de sêmen de animais infectados. Estes resultados comprovam a utilidade da caracterizaçäo antigênica com este painel de Acms na tipagem de amostras de BHV-1 e BHV-5

Soroneutralizaçäo como teste sorológico diferencial entre infecçöes pelo vírus da peste suína clássica e outros pestivírus / Serum neutralization as a differential serological test for classical swine fever virus and other pestivirus infections

Testes de soroneutralizaçäo (SN) foram realizados para detecçäo de anticorpos contra o vírus da peste suína clássica (VPSC), da diarréia viral bovina (VDVB) e do vírus da doença da fronteira ou "border disease" dos ovinos (VBDO) em amostras de soros suínos coletadas para triagem de anticorpos antiVPSC, com o objetivo de determinar o valor da SN como prova sorológica diferencial. Noventa e nove soros de uma amostragem de 16.664 foram positivos em um teste de ELISA policlonal, incapaz de diferenciar anticorpos induzidos contra os diferentes pestivírus. Quando submetidos à SN, 81 apresentaram anticorpos somente contra o VPSC. Dezessete soros apresentaram anticorpos com reatividade cruzada contra os VPSC, VDVB ou VBDO, e na maioria deles (13/17) as diferenças entre os títulos obtidos pela SN näo permitiram inferir qual seria o vírus provável indutor dos anticorpos detectados. Concluiu-se que a prova requer cuidados ao ser usada com essa finalidade, pois quando amostras säo isoladas de soro säo examinadas a variaçäo entre os títulos de anticorpos pode ser insuficiente para permitir essa diferenciaçäo, necessitando uma amostragem que inclua um número significativo de animais dentro do criatório ou da granja suspeita

Produçäo e caracterizaçäo de anticorpos monoclonais contra o vírus da rinotraqueíte infecciosa bovina (BHV-1) / Production and characterization of monoclonal antibodies to infectious bovine rhinotracheitis virus (BHV-1)

Um painel de anticorpos monoclonais (AcM) foi produzido contra antígenos da amostra "Oxford" do Vírus de Rinotraqueíte Infecciosa Bovina ou Herpesvírus Bovino tipo 1 (BHV-1). Foram selecionados cinco AcM pertencentes à classe IgG que, embora näo-neutralizantes, reconheceram todas as amostras de BHV-1.1 e BHV-1.2 quando testados por imunoperoxidase sobre cultivos de células infectadas e ELISA. Os AcM näo foram capazes de distinguir entre os subtipos BHV-1.1 e BHV-1.2

Presença de pestivírus e anticorpos contra pestivírus em soros e cultivos celulares / Presence of pestiviruses and antibodies to pestiviruses in sera and cell cultures

Cultivos celulares e soro utilizados como suplemento de meios de cultivo foram examinados em busca de pestivírus ou anticorpos contra pestivírus, por técnicas de isolamento de vírus e soro-neutralizaçäo, seguidas de revelaçäo por imunoperoxidase. Sete de um total de 13 partidas de linhagens celulares, incluindo células de origem bovina (MDBK, GBK, BT), ovina (FLK) e suína (SK6, PK15), apresentavam-se contaminadas com pestivírus. Uma linhagem celular de origem de rim de coelho (RK13) näo apresentou contaminaçäo. Duas de sete partidas de cultivos primários de testículos de neonatos bovinos preparados no local também se encontraram infectados. Soros de neonatos bovinos obtidos de abatedouros continham pestivírus em oito de 80 amostras e anticorpos anti-pestivírus em 15 de 80 amostras examinadas. Soro fetal bovino adquirido comercialmente de diferentes firmas apresentou anticorpos anti-pestivírus em quatro de oito amostras examinadas

Ausência de anticorpos contra o vírus da doença de Aujeszky em suínos no Estado do Rio Grande do Sul / Absence of antibodies to Aujeszky virus in swine in the State of Rio Grande do Sul, Brazil

A serological survey was carried out on 16.305 swine sera collected over a eight year period (1987-1994) from various municipalities of the State of Rio Grande do Sul, Brazil, in search for antibodies to Aujeszky's disease virus (ADV), using ELISA and serum neutraliozation tests. All sera examined were negative for ADV antibodies. These results suggest that ADV is not present in an enzootic form in swine in that State